消毒劑的習慣定義：能消除以細胞繁殖形態(tài)出現(xiàn)的微生物污染的化學物質。

消毒劑的分類定義（USP29<1072>）：

①抗菌劑（Antiseptic)

②化學殺菌劑(Chemical Disinfectant)

③清潔劑(Cleaning Agent)

④消毒劑(Disinfectant)

⑤衛(wèi)生洗滌劑(Sanitizing Agent)

⑥殺孢子劑(Sporicidal Agent)

⑦滅菌劑(Sterilant Agent)

一、消毒劑配制及其注意事項

按供應商的使用說明進行配制和儲存(純化水、注射用水）

潔凈室及相關受控環(huán)境使用，應進行除菌過濾。

溫度提高，殺菌效力增大。效力驗證時，在常溫下配制。

二、影響消毒劑效力的因素

pH；溫度，濃度；材質和附著物質；溶劑（水）；接觸時間；微生物的類型和數(shù)量；

三、消毒劑作用機理

鈍化胞內酶活性，影響細胞的正常代謝（如酚類）

阻斷物質運輸通道（如季銨鹽類（+電荷），附著于細胞膜特定部分（-電荷）

破壞微生物細胞（膜）的結構和功能（如醛類、含氯、過氧化物）

四、微生物對消毒劑的耐受性受以下幾方面因素的影響

形成生物膜（粘性多糖物質）

消毒劑的相互作用（中和反應）

固有耐受性和概率殘存

致死劑量

五、微生物抗力由小到大排列

一般為細菌繁殖體--真菌繁殖體--真菌孢子--病毒--分枝桿菌--細菌芽孢

六、消毒劑的選擇考慮如下因素

需控制的微生物的類型和數(shù)量

市售消毒劑的抗菌譜

消毒劑的品牌

濃度、使用方法和接觸時間

待消毒物體的材質和對消毒劑的兼容性

可能影響殺菌效力的表面有機物數(shù)量

反復使用，對設備表面的腐蝕程度

對操作者的安全性

和清潔劑/其它消毒劑的相容性

交替使用方案和對產品的影響

七、消毒劑驗證步驟

第一步：在實驗室對代表細菌在規(guī)定的使用濃度和規(guī)定的作用時間進行確認。

第二步：應用不同材質的載體，進行模擬試驗

第三步：完成驗證報告，形成SOP。

八、驗證用菌種

金黃色葡萄球菌、銅綠色假單胞菌、沙門氏菌、大腸埃希菌、枯草桿菌、白色念珠菌、黑曲霉、環(huán)境分離菌。

菌種選擇的原則：代表性，普遍性，標準菌種。(環(huán)境中常見的污染菌）。菌種的要求：不得超過5代。

采用適宜的方法保存。

九、挑戰(zhàn)微生物(USP29)

十、準備性試驗

選擇適合的中和劑：Letheen肉湯、D/E中和肉湯（酚類，季銨鹽類）、TAT肉湯基礎+吐溫20+卵磷脂+胰蛋白胨

10.1.D/E中和肉湯配方（每升）

胰蛋白胨5g；酵母膏2.5g；葡萄糖10g；硫乙醇酸鈉1g；硫代硫酸鈉6g；亞硫酸氫鈉2.5g；吐溫805g；卵磷脂7g；溴甲酚紫0.02g；最終pH7.6±0.2于25℃；

10.2.準備性試驗之中和劑毒性

將10～100CFU的微生物加入到中和劑中；薄膜過濾，沖洗，培養(yǎng)，計數(shù)￠與菌液對照組比較，回收率應>70%

10.3.準備性試驗之中和效力

使用中稀釋檢測（use-dilutiontests)(對不同濃度下，對消毒劑的效力進行篩選；針對不同標準菌株和環(huán)境微生物，確認接觸時間）

將消毒劑和中和劑混合（記錄時間）

加入10～100CFU微生物￠薄膜過濾，沖洗，培養(yǎng)，計數(shù)

與菌液對照組比較，回收率應>70%驗證方法

薄膜過濾法：菌懸液和消毒劑直接混合，在不同的時間間隔條件下過濾，培養(yǎng)后評價。

十一、驗證準備

測試菌液準備：增菌過夜，并調整至106～108CFU/ml

消毒劑稀釋至規(guī)定濃度：分裝10ml于若干無菌試管中；試管上標注消毒時間：如“1分鐘組”，“5分鐘組”，“10分鐘組”或其他要求的時間段。

配制中和劑（分裝100ml，300ml）驗證步驟：

接種：接種各驗證菌種至盛有待驗證消毒劑的試管（使接后濃度>104CFU/ml)，混合均勻，并立即開始計時。

中和、過濾：將消毒劑傾入100ml中和劑中，混合，稀釋（如需要），過濾，然后用100ml中和劑清洗濾膜，濾過3次。

陽性對照：用無菌水代替消毒劑，步驟同上。

培養(yǎng)和計數(shù)：取下濾膜放入規(guī)定的培養(yǎng)基平板，在規(guī)定的溫度、時間培養(yǎng)后，記數(shù)。和陽性對照相比，微生物數(shù)量下降應至少3個對數(shù)值（細菌芽孢至少2個對數(shù)值）。

表面挑戰(zhàn)試驗（surfacechallengetests)

使用標準菌株和典型環(huán)境分離微生物

選擇合適的濃度和接觸時間，進行試驗

獲得挑戰(zhàn)微生物數(shù)量下降的對數(shù)值

對使用新消毒劑前后環(huán)境微生物的檢出頻率和數(shù)量進行統(tǒng)計學評估（無菌生產區(qū)域、GMP要求）

根據(jù)設施的實際情況，選擇不同材質的載體（玻璃，不銹鋼，塑料薄膜，乳膠，墻面涂料，地面材質）

接種，并確認實際數(shù)量

接觸殺菌、中和、過濾。

十二、正確使用消毒劑

稀釋消毒劑時應用純化水、注射用水

設備使用后徹底清潔

將環(huán)境常見菌列入驗證范疇

輪換使用不同的消毒劑，消毒劑間要用無菌水充分清洗

消毒的SOP：配制、使用、糾正、防護等

供應商的審核和確認

十三、消毒劑的文件

標準操作規(guī)程SOP

消毒劑配制記錄

消毒劑使用記錄

消毒劑標簽消毒劑文件，應該等同于原始記錄。

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